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熒光顯微鏡和普通顯微鏡的區別
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北京長恒榮創科技

時間 : 2021-02-25 21:38 瀏覽量 : 109

    熒光顯微鏡和普通顯微鏡的區別

    熒光顯微鏡是利用紫外線為光源,用以照射被檢驗的物體,使該物體發出光源,然后在顯微鏡下進行對物體的觀察。主要是用于免疫熒光細胞,主要是由光源、濾板系統和光學系統組成的在通過目鏡和物鏡的放大來觀察樣本的熒光圖像。我們來看下這熒光顯微鏡和普通光學顯微鏡有什么樣的區別。

    1、在照明方式上看

    熒光顯微鏡的照明方式一般是用落射式,也就是說光源是通過物鏡來投放于試驗樣本上。

    2、在分辨率上看

    熒光顯微鏡利用的是紫外線做為光源,波長比較短,但是分辨率卻高于普通的光學顯微鏡。

    3、在濾光片上的不同

    熒光顯微鏡是用了兩個特殊的濾光片,在光源前用是用來濾出可見光,在物鏡和目鏡之間的使用來濾出紫外線,這樣可以保護人的眼睛。

    熒光顯微鏡也屬于光學顯微鏡的一種,主要是銀光顯微鏡所激發的波長短,所以這才導致了熒光顯微鏡和普通顯微鏡雜結構構造和使用上的不同,熒光顯微鏡大都有良好的捕捉弱光的功能,所以在極其微弱的熒光下,它的成像能力也和好。再加上近年來對熒光顯微鏡的不斷改善,噪音也大幅度降低。因此越來越多的熒光顯微鏡得到應用。

    以上是關于熒光顯微鏡和普通光學顯微鏡的區別,了解這些以后,在鑒別是不是熒光顯微鏡會有很大的幫助。

    熒光顯微鏡與普通光學顯微鏡區別及特性

    熒光顯微鏡與普通光學顯微鏡不同,它不是通過普通光源的照明觀察標本,而是利用定波長的光(通常是紫外光、藍紫光)激發顯微鏡下標本內的熒光物質,使之發射熒光,所以,熒光顯微鏡的光源所起的作用不是直接照明,而是作為種激發標本的內熒光物質的能源。我們之所以能觀察標本,不是由于光源的照明,而是標本內熒光物質吸收激發的光能后所呈現的熒光現象。由此可知,熒光顯微鏡的特點,主要是它的光源能供給大量特定波長范圍的激發光,使受檢標本內的熒光物質能獲得必要強度的激發光。同時,熒光顯微鏡必須具備相應的濾光鏡系統。熒光顯微鏡是**熒光組織化學的基本工具。它是由超壓光源、濾片系統(包括激發和壓制濾板)、光學系統和攝影系統等主要部件組成,是利用定波長的光激發標本發射熒光。

    1.激發熒光的方式:按光的波長范圍分為UV激發法(使用紫外線照明法)和BV激發法(使用藍紫光)兩種。UV激發法是用短于400nm的近紫外光進行激發。該法不存在可見的激發光,所以被觀察的熒光呈現該染料固有的熒光,容易判別標本上的特異熒光和背景組織的自身熒光。

    2.BV激發法:是以404nm、434nm為中心的由紫外至藍光進行激發。該方法使用藍光照射標本,所以熒光觀察系統的截止濾光片必須使用可完全阻斷藍光并可充分通過所需綠、黃熒光的濾光片。用于熒光抗體法的熒光色素。對于激發光的大吸收波長和熒光的大發光波長比較接近,所以BV激發法使用的濾光片必須使用銳截止式濾光片。該法可用藍光作為激發光,所以熒光色素的吸收效率較,可得到較明亮的圖像。其缺點是500nm以下的熒光無法看到,而500nm以上的使整個圖像顯黃色。在熒光抗體法中,大多以熒光色素特有的顏色來判斷其特異性,所以在討論微妙的特異性時,上述BV激發法的缺點往往影響大。

    熒光顯微鏡與普通光學顯微鏡光源的區別

    熒光顯微鏡的光源主要采用氙弧燈或汞燈,但近年來也使用高功率LED作光源,而普通光學顯微鏡通常只有鹵素或LED燈來照明。熒光顯微鏡的照明方式一般是用落射式,也就是說光源是通過物鏡來投放于試驗樣本上,而普通光學顯微鏡是直接用光源照射樣品,從而進行的觀察。在分辨率上講,熒光顯微鏡利用的是紫外線光源,波長比較短,但是分辨率卻高于普通的光學顯微鏡。在濾光片的使用上,熒光顯微鏡是用了兩個特殊的濾光片,在光源前的作用是用來濾出可見光,在物鏡和目鏡之間的作用是用來濾出紫外線,以保護觀察者的眼睛。熒光顯微鏡與普通光學顯微鏡的區別大致就是這些。

    熒光顯微鏡工作原理

    多采用200W的超高壓汞燈作光源,它是用石英玻璃制作,中間呈球形,內充一定數量的汞,工作時由兩個電極間放電,引起水銀蒸發,球內氣壓迅速升高,當水銀完全蒸發時,可達50~70個標準大氣壓力,這一過程一般約需5~15min。超高壓汞燈的發光是電極間放電使水銀分子不斷解離和還原過程中發射光量子的結果。它發射很強的紫外和藍紫光,足以激發各類熒光物質,因此,為熒光顯微鏡普遍采用。

    1.激發濾板根據光源和熒光色素的特點,可選用以下三類激發濾板,提供一定波長范圍的激發光。

    紫外光激發濾板:此濾板可使400nm以下的紫外光透過,阻擋400nm以上的可見光通過。常用型號為UG-1或UG-5,外加一塊BG-38,以除去紅色尾波。

    紫外藍光激發濾板:此濾板可使300~450nm范圍內的光通過。常用型號為ZB-2或ZB-3,外加BG-38。

    紫藍光激發濾板:它可使350~490nm的光通過。常用型號為QB24(BG12)。

    最大吸收峰在500nm以上者的熒光素(如羅達明色素)可用藍綠濾板(如B-7)激發。


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